Technische Daten
Säulen-/Entsalzungsplatte Sephadex G-25 Gebrauchsanweisung
Produkteinführung
Die Dextran G-25-Entsalzungssäule/-platte nutzt hauptsächlich die Molekularsiebfunktion ihrer Dextran-Gelpolymerverbindungen mit Netzwerkstruktur. Aufgrund der unterschiedlichen Molekulargewichte der getrennten Substanzen werden Substanzen mit hohem Molekulargewicht (z. B. Proteine) beim Durchgang durch das G-25-Gel außerhalb der Gelpartikel blockiert und fließen durch die Lücke zwischen den Gelpartikeln heraus. Der Vorgang ist kurz und die Bewegungsgeschwindigkeit hoch, sodass Substanzen mit hohem Molekulargewicht zuerst aus der Säule/Platte fließen. Substanzen mit niedrigem Molekulargewicht (z. B. Salze) können in die Mikroporen der Gelpartikel eindringen. Der Vorgang ist langwierig und langsam, und Substanzen mit höherem Molekulargewicht brauchen länger, um aus der Gelsäule/-platte zu fließen, sodass sie schließlich ausgewaschen und die Substanzen somit getrennt werden.
Die Parameter der Medien der Sephadex G-25-Serie sind in der Tabelle aufgeführt
| Projekt | parametrisch |
| Merkmale | Schmutziges weißes Gel |
| Durchschnittliche Partikelgröße (trocken) | 150±100μm 92,8 |
| Partikelgrößenverteilung (45-165 μm) % | ≥80 |
| Split Range (Portugiesisch) | 100-5000 |
| Trennbereich (Globulin) | 1000-5000 |
| Wasserverhältnis (ml Nasskleber/g Trockenpulver) | 2,3-2,7 |
| Lineare Durchflussrate (0,3 MPa, cm/h) | 697.1 |
| Maximale Durchflussrate (cm/h) | 150 |
| Konservierungslösung | 0,2 M NaAc 20 Prozent Ethanol |
| Lagerbedingungen | 4°C–30°C |
Die Modellnummer G gibt die pro Gramm Gel absorbierte Wassermenge an. Beispielsweise gibt das Gelmedium G-25 an, dass pro Gramm trockenem Gel 2,5 ml Wasser absorbiert werden, d. h. den Gelausdehnungskoeffizienten, der gleichzeitig die Porengröße der Gelpartikel ist.
Chromatographiemedien der Sephadex G-25-Serie werden häufig für Pufferaustausch, Proteinentsalzung, Trennung von Proteinen mit unterschiedlichen Molekulargewichten usw. verwendet. Das maximale Probenvolumen für die Entsalzung und Pufferung kann bis zu 30 % des Säulenbettvolumens betragen.
Workflow
1. Ausbalancieren des Lautsprechers/Tablets: Sobald der Lautsprecher/Tablet mit dem vorgeladenen G-25 Sefadex aufrecht steht, balancieren Sie die G-25 Entsalzungssäule/Tablette mit einem Puffer, der das 5- bis 10-fache Volumen der Säulenschicht enthält. (Hinweis: Der Puffer ist der gewünschte Ersatzpuffer, z. B. PBS, deionisiertes Wasser usw.; achten Sie auf die Durchflussrate.)
2. Probenahme: Nachdem die Gelsäule/-platte mit dem Puffer ausgeglichen ist, pipettieren Sie die Probe und geben Sie sie langsam zum Sieb auf der Geloberfläche, öffnen Sie die untere Kappe und lassen Sie die Probe langsam in das Gel eintreten, bis sie bündig mit dem Gel abschließt. (Hinweis: Das Probenvolumen am Boden beträgt üblicherweise 10–30 % des Säulenschichtvolumens, die Probenviskosität sollte nicht zu hoch sein, da sich sonst die Lebensdauer der G25-Drüse verkürzt.)
3. Elution: Die Probe wird mit einem Elutionspuffer eluiert, nachdem sie vollständig in das Gel eingedrungen ist. (Hinweis: Die empfohlene Probenflussrate beträgt etwa 1–2 ml/min. Das Elutionsvolumen beträgt üblicherweise das 1,2- bis 2,0-fache des Probenvolumens.)
4. Reinigung und Regeneration: Einige Proteine werden in Kochsalzlösung denaturiert, daher kann es notwendig sein, diese Proteine durch Waschen des Säulenbetts mit 0,2 M NaOH oder einem anderen nichtionischen Detergens zu reinigen.
5. Lagerung: Nach dem Experiment in 0,02 %iger Natriumazidlösung oder 20 %iger Ethanollösung lagern.